產(chǎn)品名稱：雞胚成纖維細(xì)胞永生化（種屬鑒定）

規(guī)格： 5*10 5   

細(xì)胞詳述

近年來，有關(guān)干細(xì)胞的研究是生物技術(shù)領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。胚胎成纖維細(xì)胞具有相對(duì)容易獲得，增殖能力強(qiáng)等特點(diǎn)，因此胚胎成纖維細(xì)胞常作為哺乳動(dòng)物干細(xì)胞培養(yǎng)的飼養(yǎng)層細(xì)胞，主要分泌謀學(xué)細(xì)胞因子，如成纖維細(xì)胞生長因子，白血病抑制因子等，以促進(jìn)干細(xì)胞增殖及抑制分化。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項(xiàng)：  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞特性

1) 細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常胚胎組織。

2) 細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5) 細(xì)胞生長方式：長梭狀細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

產(chǎn)品的運(yùn)輸和保存

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1) 1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2) T-25培養(yǎng)瓶充滿wan全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

產(chǎn)品使用

1) 本產(chǎn)品僅能用于科研

2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動(dòng)物和人的審核

3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核

雞胚成纖維細(xì)胞永生化相關(guān)細(xì)胞列表

01 什么是細(xì)胞永生化？

   正常組織來源的細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下可分裂生長，但經(jīng)過有限次數(shù)的傳代后，就會(huì)停止增殖，發(fā)生衰老和死亡，這種現(xiàn)象稱之為海夫利克極限。有的細(xì)胞自發(fā)或受外界因素的影響，可以從增殖衰老危機(jī)中逃離，從而擁有無限增殖的能力，該過程稱之為細(xì)胞永生化（cell immortalization）。

   細(xì)胞永生化是癌變的必經(jīng)途徑。

02 細(xì)胞永生化的方法？

   細(xì)胞自發(fā)永生化的幾率非常小，于人類細(xì)胞就更為罕見。

   人為干涉讓細(xì)胞永生化的方法包括：放射處理、端粒酶激活、病毒基因轉(zhuǎn)染、原癌基因激活、抑癌基因抑制等。其中，聽過慢病毒感染使細(xì)胞過表達(dá)猴腎病毒SV40 T抗原或人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶hTERT基因，是常用的兩種細(xì)胞永生化的方法。

01端粒酶激活

   端粒酶是一種能延長端粒末端的核糖核蛋白酶，由RNA和蛋白質(zhì)組成。端粒酶能以自身的RNA為模板，從端粒DNA3’-OH 末端延伸端粒或合成新的端粒DNA， 以補(bǔ)償細(xì)胞分裂時(shí)染色體末端的縮短，從而維持端粒的長度，使細(xì)胞不會(huì)因端粒耗盡而出現(xiàn)凋亡。

   正常情況下，大多數(shù)體細(xì)胞端粒酶的表達(dá)是嚴(yán)格調(diào)控的，表達(dá)是瞬時(shí)和低水平的。在原代培養(yǎng)的細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)人端粒酶催化亞基(hTERT)基因能穩(wěn)定端粒的長度，使細(xì)胞易于永生化，因此hTERT的激活是細(xì)胞永生化的重要步驟。

   雖然激活端粒酶活性能夠使多種人和動(dòng)物的細(xì)胞永生化，但是對(duì)于有些細(xì)胞，重建端粒酶活性并不足以使細(xì)胞永生化，還需要借助癌基因法。

02癌基因法

   一些原癌基因，如Myc, c-Jun, c-Ias, vsrc和Mdm2，通過基因轉(zhuǎn)染可介導(dǎo)目的細(xì)胞永生化。c-Myc是最早被發(fā)現(xiàn)的原癌基因，有許多與瘤化相關(guān)的功能區(qū)域，其轉(zhuǎn)錄表達(dá)的蛋白通過核膜進(jìn)入細(xì)胞核與端粒酶的啟動(dòng)子結(jié)合位點(diǎn)特異性結(jié)合，誘導(dǎo)端粒酶mRNA快速表達(dá)，直接激活端粒酶活性，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入永生化。

   細(xì)胞永生化過程中，抑癌基因如p53, pRb, BRCA1, DPC4等，通過等位基因隱性作用、抑癌基因的顯性負(fù)作用等逐漸失去活性，細(xì)胞老化途徑受阻。實(shí)驗(yàn)證明端粒酶的活性與抑癌基因表達(dá)產(chǎn)物的下調(diào)有相關(guān)關(guān)系，推測抑癌基因的失活協(xié)同端粒酶的激活共同參與細(xì)胞永生化進(jìn)程。

03病毒基因轉(zhuǎn)染

很多病毒感染能夠誘導(dǎo)細(xì)胞永生化，例如EB病毒(epstein-barr virus, EBV)、猿猴病毒40 (simian virus40, SV40)和人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV)。這些病毒感染其天然宿主細(xì)胞，能誘導(dǎo)細(xì)胞永生化。

   EBV能使B淋巴母細(xì)胞永生化形成淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系，它是通過潛伏蛋白激活細(xì)胞因子與其受體相互作用的途徑使細(xì)胞永生的。EBV永生化B細(xì)胞的一個(gè)顯著的特點(diǎn)是端粒酶活性的提高，這可能是導(dǎo)致B細(xì)胞永生的主要原因。目前，EB病毒介導(dǎo)的細(xì)胞永生化應(yīng)用最多的是B淋巴細(xì)胞，其他細(xì)胞中的應(yīng)用很少。

   SV40是簡單的真核細(xì)胞病毒，SV40的T抗原片段是常用的目的片段，將其整合入靶細(xì)胞核內(nèi)并表達(dá)，可導(dǎo)致細(xì)胞增殖活力的改變并表現(xiàn)出多種與腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)化顯型。應(yīng)用的方法包括：野生型SV40病毒共培養(yǎng)感染靶細(xì)胞、磷酸鈣法、電穿孔以及逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法等。

   HPV已成功將人的包皮細(xì)胞、角化上皮以及乳腺、胰導(dǎo)管和口腔等的上皮細(xì)胞永生化。HPV病毒的早期表達(dá)蛋白E6和E7在細(xì)胞永生化中起決定性作用。E6和E7蛋白能夠改變細(xì)胞的終末分化，誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入S期，使細(xì)胞繞過正常細(xì)胞的周期檢查點(diǎn)。