豚鼠白介素12(IL-12/P70)  ELISA試劑盒

英文：Guinea Pig Interleukin-12,IL-12/P70 ELISA Kit

規格：96T/48T

ELISA試劑盒又稱為酶聯免疫試劑盒，用于對液體樣本中的目標物質進行定性和定量檢測。隨著國家對科研項目的重視，在科研單位和廣大科研類院校也越來越受歡迎。
ELISA試劑盒的基本原理

（1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學活性；

（2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性；

（3）酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。

由于ELISA法一方面是建立在抗原與抗體免疫學反應的基礎上，因而，具有特異性。而另一方面又由于酶標記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結合物，它可以催化底物分子發生反應，產生放大作用，正因為此種放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一種既敏感又特異的方法。

特點

一、高效、靈敏、特異的抗體;二、穩定的重復性和可靠性;三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體;四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型;五、節省實驗經費。

制備方法

1)抗原表位的計算機篩選;2)抗原的制備;3)血清的采集;4)間接ELISA方法的建立;5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗證;6)試劑盒的穩定性驗證;7)對屠宰場進行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強、穩定性合格、重復性好。

樣本類型

1、 血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、 細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。5、 保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑盒成分

1.預包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T

2.酶標記抗體: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 13.標準品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 24.EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 15.標記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 16.顯色劑: TMB底物液 15mL x 17.終止液: 1N硫酸 12mL x 18.濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1

豚鼠白介素12(IL-12/P70)  ELISA試劑盒 ELISA檢測系統是免疫學反應應用到科研生產中最為廣泛最為靈敏的技術手段，有著十分重要的作用。操作步驟雖然看起來比較簡單但是實驗過程有很多的操作要點需要掌握，操作步驟中如果稍有不慎，操作不合理的地方，就會造成很多問題從而影響到ELISA試劑盒檢測的準確性，大大降低試驗質量。比如說花板，ELISA試劑盒假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低……這就需要我們在實驗過程中多做總結，逐步完善，還有就是要多多學習，分享學習心得。下面就大體總結一下ELISA實驗的常見問題和解決方法，同大家一起分享。

1、包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這關系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。ELISA試劑盒②脂類物質:可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱或冷風吹干，待酒精揮發后，讓脂質自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯后才能固定在固相載體上。

2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應注意以下原理：由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下最終可不可以應用到自己試驗當中去。人ELISA試劑盒常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

3、封閉：繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用（5%-10%）;還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。但最終選用什么，要依據試驗具體來實踐。

4、洗滌板：可以說在ELISA操作中，洗滌是最主要的關鍵技術。因為聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，為達到分離游離的和結合的酶標記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質，以及非特異性地吸附的干擾物質，在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。所以在洗板時會有一定誤差，人為因素很大（當然有條件的用洗板機除外），洗的不*或串了孔，對如此靈敏的ELISA系統可是不小的影響。

5、加抗體標本（和二抗）:注意該換槍頭時換槍頭。ELISA試劑盒標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費，太低則著色淺。

6、顯色:顯色系統又很多，我們一開始做的時候，要選擇適宜的顯色系統。注意顯色系統酶活性底物的保存HRP結合物加硫柳泵，AP結合物可加疊氮鈉。

7、每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現問題也好分析。

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兔乙酰膽堿受體抗體(AChRab) ELISA試劑盒

兔誘導型一氧化氮合成酶(iNOS) ELISA試劑盒

兔熱休克蛋白90(HSP-90) ELISA試劑盒

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兔糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c) ELISA試劑盒

兔半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C) ELISA試劑盒

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兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ) ELISA試劑盒

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兔子血栓調節蛋白(TM)  ELISA試劑盒

兔子血纖蛋白原降解產物(FDP) ELISA試劑盒

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兔子神經特異性烯醇化酶(NSE) ELISA試劑盒

兔子神經生長因子(NGF) ELISA試劑盒

兔子脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S) ELISA試劑盒

兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP) ELISA試劑盒

兔核因子?b(NF?b)  ELISA試劑盒

兔子前列腺素E1(PGE1) ELISA試劑盒

兔子皮質酮/腎上腺酮(CORT) ELISA試劑盒

兔子皮質醇(Cortisol) ELISA試劑盒

兔子腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP) ELISA試劑盒

兔子內皮抑素(ES) ELISA試劑盒

兔子內皮素1(ET-1) ELISA試劑盒

兔子免疫球蛋白G(IgG)  ELISA試劑盒

兔子免疫球蛋白E(IgE) ELISA試劑盒

兔子免疫球蛋白A(IgA)  ELISA試劑盒

兔子可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1) ELISA試劑盒

兔子可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1) ELISA試劑盒

兔子可溶性E選擇素(sE-selectin) ELISA試劑盒

兔子巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5) ELISA試劑盒

兔子堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)  ELISA試劑盒

兔子免疫球蛋白M(IgM)  ELISA試劑盒

兔子甲狀腺素(T4) ELISA試劑盒

兔子基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1) ELISA試劑盒

兔子基質金屬蛋白酶9(MMP-9) ELISA試劑盒

兔子基質金屬蛋白酶4(MMP-4) ELISA試劑盒

兔子基質金屬蛋白酶5(MMP-5) ELISA試劑盒

兔子睪酮(T) ELISA試劑盒

兔子肝細胞生長因子(HGF) ELISA試劑盒

兔子γ干擾素(IFN-γ)  ELISA試劑盒

兔子端粒酶(TE) ELISA試劑盒

兔子單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF) ELISA試劑盒

兔子促腎上腺皮質激素(ACTH) ELISA試劑盒

兔子促卵泡素(FSH) ELISA試劑盒

兔子促甲狀腺素(TSH) ELISA試劑盒

兔子雌二醇(E2) ELISA試劑盒

兔子腸脂肪酸結合蛋白(iFABP) ELISA試劑盒

兔子表皮生長因子(EGF)  ELISA試劑盒

兔子白血病抑制因子受體(LIFR) ELISA試劑盒

兔子白三烯B4(LTB4) ELISA試劑盒

兔子白介素8(IL-8/CXCL8) ELISA試劑盒

兔子白介素6(IL-6) ELISA試劑盒

兔子白介素4(IL-4) ELISA試劑盒

兔子白介素3(IL-3) ELISA試劑盒

兔子白介素3(IL-3) ELISA試劑盒

兔子白介素1β (IL-1β) ELISA試劑盒

兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ) ELISA試劑盒

兔子白介素10(IL-10) ELISA試劑盒

兔子白介素1(IL-1) ELISA試劑盒

兔子S100B蛋白(S-100B) ELISA試劑盒

兔子S100蛋白(S-100) ELISA試劑盒

兔主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ) ELISA試劑盒

兔子凝血酶受體(TR) ELISA試劑盒

兔子可溶性P選擇素(sP-selectin) ELISA試劑盒

兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP) ELISA試劑盒

兔子Ⅰ型膠原(Col Ⅰ) ELISA試劑盒

兔子Ⅱ型膠原(Col Ⅱ) ELISA試劑盒

兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP) ELISA試劑盒

兔子Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT) ELISA試劑盒

兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ) ELISA試劑盒

兔子C反應蛋白(CRP) ELISA試劑盒

兔子內皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3) ELISA試劑盒

兔子膽固醇酯轉移蛋白(CETP) ELISA試劑盒

兔子可溶性粘附分子(Sam) ELISA試劑盒

兔子抗中性粒細胞顆?？贵w(ANGA) ELISA試劑盒

兔子孕激素/孕酮(PROG) ELISA試劑盒

兔子膠原酶II(Collagenase II) ELISA試劑盒

兔子膠原酶I(Collagenase I)  ELISA試劑盒

兔子腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(TRAIL-R3) ELISA試劑盒

兔子腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(TRAIL-R3) ELISA試劑盒

兔子巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3) ELISA試劑盒

兔子神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP) ELISA試劑盒

兔胸腺細胞球蛋白(ATG) ELISA試劑盒

兔子Caspase-3/CPP32  ELISA試劑盒

兔子血紅素氧合酶1(HO-1)  ELISA試劑盒

兔子 PS  ELISA試劑盒

兔子肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A) ELISA試劑盒

兔克拉拉細胞蛋白(CC16) ELISA試劑盒

兔P-選擇素(P-selectin)  ELISA試劑盒

兔醛固酮(ALD)   ELISA試劑盒