一.個(gè)別人的培養(yǎng)體系出現(xiàn)問(wèn)題

1.檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。
(a) 如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素(必須添加!),細(xì)胞污染則是不可避免的。
   1)用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查
   2)如果細(xì)胞被污染則要棄掉。
(b)由于支原體污染不容易覺(jué)察到，因此必須定期檢測(cè)

(c)檢測(cè)可能污染的途徑和原因

2.檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10X儲(chǔ)存液，而現(xiàn)在購(gòu)買(mǎi)的培養(yǎng)基更換為1X液體，而隨后證明問(wèn)題就出自于此，處理方法請(qǐng)參見(jiàn)下則分享內(nèi)容。

3.如果問(wèn)題與培養(yǎng)基無(wú)關(guān)，那么很可能還是細(xì)胞的問(wèn)題。
(a)復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞，并且與正在培養(yǎng)的細(xì)胞加以比較。兩種細(xì)胞的培養(yǎng)應(yīng)分開(kāi)，以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按(b) ~ (d) 步的方法做排查:
(b)對(duì)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并繪制生長(zhǎng)曲線與以前培養(yǎng)該細(xì)胞的資料進(jìn)行比較，檢在是否有下列改變:
   1)傳代時(shí)是否接種密度過(guò)低。
   2)細(xì)胞傳代是否過(guò)于頻繁。
   3)傳代前細(xì)胞平臺(tái)期是否過(guò)長(zhǎng)。
(c)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號(hào)?檢查批號(hào)和供應(yīng)商。
(d)是否細(xì)胞分離過(guò)程中嚴(yán)重?fù)p傷了細(xì)胞?應(yīng)檢測(cè):
   1)胰蛋白酶(其他消化試劑)消化時(shí)間是否過(guò)長(zhǎng)。
   2)消化液的濃度和活性是否過(guò)高、過(guò)強(qiáng)。

   3)胰蛋白酶消化時(shí)、孵箱溫度是否過(guò)高。
   4)吹打消化細(xì)胞時(shí)是否過(guò)于用力。
   5)細(xì)胞是否對(duì)EDTA過(guò)于敏感(如果添加了EDTA)，
   6)胰蛋白酶稀釋是否有誤。
   7)是否使用了一批劣質(zhì)的胰蛋白酶消化液。

二.問(wèn)題較為普遍，其他人也遇到同樣的困難
檢查共用的設(shè)備和試劑
溫室和孵箱溫度
1.溫度和溫度設(shè)定不準(zhǔn)。
 (a)自動(dòng)調(diào)溫器損壞。
 (b)開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
 (c)孵箱門(mén)未關(guān)緊。
 (d)風(fēng)扇損壞造成散熱不均。
用便攜式溫度表重新標(biāo)定孵箱溫度。

2.孵箱濕度不能維持
 (a)水盤(pán)中未加水，
 (b)孵箱有滲漏。
 (c)開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁，
 (d)在Petri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBSA,每日稱(chēng)重，以檢查蒸發(fā)率。

3.孵箱的C02濃度不準(zhǔn)
 (a)開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
 (b)CO2控制器出現(xiàn)問(wèn)題。

4.用預(yù)先標(biāo)定的培養(yǎng)基監(jiān)測(cè)箱體內(nèi)的PH。

5.用CO2探頭(carborite)檢測(cè)孵箱環(huán)境。

6.用標(biāo)準(zhǔn)混合氣重新標(biāo)定零值和CO2實(shí)際值。

三.實(shí)驗(yàn)室是否發(fā)生其他變化?

1.與細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的人員是否改變?
 (1)培養(yǎng)細(xì)胞人員是否發(fā)生增減
 (2)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)人員是否發(fā)生增減
 (3)實(shí)驗(yàn)人員的準(zhǔn)備過(guò)程是否規(guī)范
 (4)實(shí)驗(yàn)人員是否接受過(guò)系統(tǒng)訓(xùn)練
 (5)實(shí)驗(yàn)空間和布局是否過(guò)于擁擠

2.細(xì)胞培養(yǎng)所需材料是否改變?
 (1)供應(yīng)商

（2）批號(hào)

（3）類(lèi)型

（4）存儲(chǔ)期限

3.細(xì)胞培養(yǎng)的操作過(guò)程是否有變化？

（1）孵育時(shí)間

（2）操作速度

（3）操作順序

（4）位置

（5）范圍大小

4.細(xì)胞培養(yǎng)的專(zhuān)業(yè)儀器設(shè)備是否完好？

（1）新近購(gòu)置：是否新添儀器設(shè)備？

（2）運(yùn)行狀況：是否設(shè)備損壞？

（3）擺放位置：正在使用的儀器是否有足夠的擺放空間，是否要移動(dòng)鄰近的儀器？

（4）操作溫度：儀器是否在正常的溫度范圍內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)，你的樣品是否也需此溫度范圍？