細(xì)胞培養(yǎng)做為生物學(xué)研究最基礎(chǔ)的技術(shù)之一，可以說(shuō)是滲透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。細(xì)胞好不好，就看你懂不懂細(xì)胞培養(yǎng)的各種技術(shù)了。

?  原代培養(yǎng)

從原代組織中分離細(xì)胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和膠原酶）。

用無(wú)菌的解剖刀和剪子將組織剪成3~4mm小片，用平衡液（無(wú)鈣鎂離子）清洗組織碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg組織加入1ml胰蛋白酶）或者膠原酶（Collagenase，50~200單位/ml），孵育4-18h。離心取上清后，用平衡液清洗幾次后，用*培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)。

?  傳代培養(yǎng)

依據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的特點(diǎn)，傳代方法有3種：

1. 懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代（離心法）

將懸浮細(xì)胞離心（1000 rpm， 3 min）去上清，收集沉淀物加新培養(yǎng)基，混勻后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

2. 半懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代（直接吹打法）

此類(lèi)細(xì)胞（如Hela細(xì)胞）部分貼壁，但黏貼不牢，可用直接吹打法使細(xì)胞從瓶壁上脫落下來(lái)，進(jìn)行傳代。

3. 貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞傳代（酶消化法）

去除瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液后，加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液覆蓋整個(gè)瓶底為準(zhǔn)）37℃靜置2-10min（顯微鏡下動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)）。移去蛋白酶液，加入培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，離心將細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液。吸取1/10—1/40細(xì)胞懸液，接種于含有適量新鮮培養(yǎng)液的新培養(yǎng)瓶中進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)不斷進(jìn)步的過(guò)程，在平時(shí)做好積累，量變才會(huì)有質(zhì)變。